Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1改型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出来家兔自身免疫球肽到显现出来1HG肝炎药理学副作用的成果率在儿童末期就有很好的详细描述，多个家兔自身免疫球肽非典型的儿童里面有70%在家兔素叠加后10周内患上肝炎，而随访15年的儿童这一比重减少到84%。远比之下，占药理学1HG肝炎一半以上的HG1HG肝炎的胃癌机制还没有得不到充分的研究工作。

越来越多的人开始适用分期系统来定义1HG肝炎的成果：生殖在显现出来多种家兔自身免疫球肽时转到第1期中，显现出来体温异常时转到第2期中，显现出来副作用时转到第3期中。一些多发家兔自身免疫球肽非典型的生殖，在1期和2期，成果较快速，并其发展为胃癌的1HG肝炎。我们之前详细描述了一组在首次检查到多种家兔自身免疫球肽抽样后将近10年无肝炎的极慢速成果者，这组病症次数少，但特征比较明确。随后，我们发现家兔自身肽质特异性CD8+T肽反应在成果平稳的病症里面基本不依赖于，但在近期胃癌和长期依赖于的肝炎病症里面很容易检查到。这意味著表明，与成果病症远比，这些病症自身免疫反应的抑制提高。

早期研究工作表明，尽管抑制性T肽(Treg)数量正常人，但肝炎病症依赖于一些功能不足之处，其里面以外对IL-2的反应能力减少。此外，肝炎病症里面的振荡CD4+T肽意味著对抑制突显抵抗性，表现为振荡T肽的抑止减弱，自然产生的Treg和体外产生的抑制Treg，以及肽质亲身经历的CD4+T肽里面IL-2反应减弱。本研究工作的目的是详细描述了CD4+抑制性T肽(Treg)在一小群极平稳成果者里面的特征，他们的年龄为43岁(31-72岁)，随访时间段为18-32年。

步骤：BOX研究工作是一项以许多人为基础的纵向研究工作，在21岁请注意确诊的病症亲属里面检查1HG肝炎的危险各种因素。我们之前详细描述了长期平稳成果者的特征，他们保持多重家兔自身免疫球肽非典型超过10年，但没有显现出来肝炎的药理学副作用，慢速性或非同步进行性自身免疫。随后，10名独自保持无肝炎并愿意提供大量血液抽样的平稳成果者纳入T和B肽功能分析。在在此之前的研究工作里面，8名慢速成果者(SP组)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的家兔自身免疫球肽非典型。所有的自发性都处于1HG肝炎成果的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身免疫球肽对某些肽质的非典型反应，然而，一名病症早就处于2期将近6年，但没有显现出来药理学副作用，一名病症被诊断为肝炎，该病患72岁，在采集实验抽样时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据分析里面对该NADP同步进行了单独评估。分离外周血单个反应器肽(PBMCs)，采用多参数流式肽术和T肽抑止测试评估NADP里面Treg的基频、性状和功能。适用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)同步进行无监督聚类分析，评估Treg性状。

结果：与健康NADP远比，来自慢速成果体的知觉CD4+T肽的监督聚类看出，激活的知觉CD4+ Treg基频减少，与止痛药抑制的TNFR关的肽(GITR)理解减少有关。一名HbA1c增大的病症与成果平稳者和匹配的相异组远比，Treg谱有所不尽相同。功能分析表明，与健康NADP远比，来自平稳成果体的Treg酪氨酸的CD4+振荡T肽抑止明显受损。表现为对振荡CD4+T肽CD25和CD134理解的抑止减少。

布1 深入的性状分析看出，CD4+Treg亚HG在慢速成果队列里面减少。由FlowSOM填充的Treg室，聚集在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -肽上。根据标识物理解鉴定出10个元簇:知觉T肽_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T肽;HLA-DR + GITR +知觉T肽;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)适用9个不尽相同Treg标识填充的10个元簇的MST。每个键值代表一个坦克部队(100个坦克部队)，很大的元坦克部队(10个元坦克部队)在键值组周围上色。每个键值里面的饼布问到单个标识的理解级别。(b)每个元聚类的热布，以看出整体标识理解。(c, d)为HD组(c)和SP组(d)填充布，以及FlowSOM辨认的每个元簇的较厚。(e-l)远比较轻元素为每个metacluster箱两条路布表(轻元素> 0.05%)确定为HD和SP组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T肽(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T肽(l)。粉红色格子代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩化验。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 适用CITRUS的预测模HG证明，Treg基频的减少是成果平稳的logo。分级门控(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP自发性和匹配的HD自发性在CD4+CD45RA−T肽上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族裔的特色布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR理解同步进行分离，模拟FlowSOM族裔。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)组以及NADPSP 606(粉红色)里面CD25+ cd127的基频综合布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控邻域的箱两条路布表;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度着色，箭头突出的簇被辨认为SP和HD队列中间的不尽相同。(j)箱两条路布表看出了在SP(蓝点)和HD(灰点)组里面，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的远比较轻元素(比重)。(k)直方布看出每个簇的性状(粉红色)和Treg标识远比较理解与背景理解(深蓝色);上列，磁盘Treg_3;下面一行，磁盘Treg_4。背景与所有其他簇里面标识的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩化验

布3 与健康献血者远比，成果平稳者知觉treg的GITR减少。每个知觉CD4+T肽元簇(知觉T肽_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T肽;HLA-DR + GITR +知觉T肽;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个理解标识的推移。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的理解热布(sp606不以外在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR理解串联，看出直方布(c)和综合布(d)。Wilcoxon配对记号秩和化验，p< 0.07(粉红色)所有NADP以外，p< 0.05(深蓝色)NADPSP 606和匹配的HD不以外在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR理解，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(粉红色)串联，看出直方布(e)和综合布(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对记号秩化验

布4 来自平稳成果的CD4+ treg肽控制振荡CD4+T肽的能力减少。SP组用深蓝色的两条路线和格子问到，HD组用灰色的两条路线和格子问到，粉红色的两条路线/格子问到NADPsp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肽同步进行分选。CD4+CD25−(应答者)被标识为CFSE, Treg按观察的比重滴定。用抗CD3 /28微珠还原肽，养成3天后同步进行流式肽术检查。(a-d)与CD4+应答者远比较应的treg养成(暂时性)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者养成。(a,b,f) CFSE抑制(a,e)和CFSE抑止多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止多于。适用非典型相异(激活的响应肽不含treg)算出抑止多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

布5 振荡CD4+T肽对平稳成果的T肽还原的抑止非常敏感性。SP组用深蓝色的两条路线和格子问到，HD组用灰色的两条路线和格子问到，粉红色的两条路线/格子问到NADPsp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肽同步进行分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel标识，treg按观察的比重滴定。用抗CD3 /28微珠还原肽，养成3天后同步进行流式肽术(CD25反染)和肽因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606应答者共同养成。(a,b) CFSE抑制(a)和CFSE抑止前年(b)。(c,d) CD25抑止前年(c)和CD134抑止前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成里面的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

推论：我们得出的推论是，来自平稳成果子的还原知觉CD4+Treg在GITR理解里面得不到了扩展和丰富，阐释了进一步研究工作Treg在1HG肝炎后果生殖里面的表型的必要性。

原文引自：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28